[网络技术论坛微生物检测问题回答总结

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    [网络技术论坛微生物检测问题回答总结

    %title插图%num食品微生物检测

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    Q1

    新版29921,在即食水产品中加入单增李斯特氏菌,检测标准指向定量法,但我们检测到的客户样品根本没有菌落生长。我们需要用第二种方法来检测吗?

    国标明确规定限值单位的方法不能改变,只能通过本单位确定第二种方法,样品应采用第二种方法。

    国标明确规定限值单位的方法不能改变,只能通过本单位确定第二种方法,样品应采用第二种方法。

    Q2

    预包装食品,但散装称重,也适用于29921吗?

    是的,国家标准。详见:GB 31607-2021 国家食品安全标准 散装食品中致病菌限量条款4.1%title插图%num

    Q3

    如果客户发送4个样品,但大包装中有10个独立的小包装,微生物5平行样品可以吗?

    与客户确认销售单位是大包装还是小包装? 如果只卖大包装,请让客户再送一个大包装样品,然后从五个不同的大包装样品中随机取样。若以小包装销售,可从独立小包装样品中随机取5份作为微生物。

    Q4

    开瓶后培养基最长能用多久?有要求吗?

    没有明确规定,但建议在一年内使用。实验室根据储存条件进行时间验证SOP中规定。

    Q5

    软胶囊产品取样称量需要破胶囊吗?

    方法验证时,应确认该基质是否可用于45℃预热稀释液溶解均匀。如果没有,可以先用无工具破碎。注意,从样品匀液制备到样品接种,整个过程不得超过15min。

    Q6

    霉菌和酵母菌的总数结果中是否计算了孟加拉红培养基上生长的细菌数?

    否。

    Q7

     为什么血浆凝固酶需要半小时一次,共6小时?半凝固后不凝固,算不算?

    有两种情况:1)如果凝固体积大于原体积的一半以上,则为阳性;2)若不到一半,则重复试验。

    Q8

     三糖铁,穿刺时要注意什么,以免底色不被硫化氢覆盖,难以判断?

    避免细菌过多,注意:1)接种针轻轻接触菌落中心,选择少量培养物;2)先在斜面上划线,然后在底部穿刺。

    Q9

    菌落计数RSD标准来源是什么?

    《2020中国药典》四部9201 样品中微生物定量检验方法的验证。

    Q10

    大肠埃希氏菌首次倒平板和覆盖VRBA-MUG吗? 

    初倒用10-15ml VRBA琼脂混凝固后,用3-4ml VRBA-MUG琼脂覆盖。

    Q11

     自己的机构复检,样品已经开封,如何复检?   

    机构采样量一般大于检验量,可申请同批次未开封样品进行复试。按实验室SOP规定流程处理。实验室复试的目的是通过实验室复试OOS调查,分析原因,确认样品污染或实验室污染。

    Q12

    发酵酸奶特别稠,接近半固体,限值是n=5 c=1 m=1 M =10这 样品也要按液体检测吗?

    称量不能吸,25g至225ml稀释液,取10mL(相当于1g)培养基的用量在大平皿中相应增加。

    Q13

    菌总计数, 10-1 稀释平板分别是 0 和 1, 结果报告< 10,还是 5?

    两种主流报告方式如下表所示:  %title插图%num

    主流处理方式: 这两种报告方式并不纠结,但在本实验室中只使用一种,

    以 SOP 来明确, 避免混乱。 实验室内的甲采用方法 1.B采用方法 2;昨天

    采用方式 1.今天用的方法 2.明天用 1.后天采用 2。在这种情况下,

    是实验室技术管理的禁忌!

    谈谈我的个人看法——

    我会采取第 3 直接报告是一种报告方式 10。理由如下:  

    报告< 10 的话, 两块平板都是 0 与结果相比, 它实际上掩盖了数据的真实图像和问题。

    报告 5 的话, 其实这个结果的可信度是有问题的。整个 GB4789 没有提到检出限的概念。所谓的“检出限< 10,是广大网友的通俗理解。  

    但这里的理解是有偏见的。 假如我们试图引入理化的概念来理解,其实这里的 10不是检出限, 但定量限;5是检出限。显然,如果达到检出限,但未达到定量限,这样的结果自然没有准确定量的意义。(自然,报告 5 毫无意义!)

    也许有人会说, 这种情况报告 10, 难道不是和两块平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平板平 1.报告结果为 同样的情况也掩盖了数据的真实性吗?

    非也!请看反证:  

    如果液体原液有两块平板 0 和 1, 报告的结果自然是 1, 而绝对不是 0.5。也不会报告 1。如果产品的限值要求是 1 在这种情况下报告 1 只有结果才能得出判断产品真实性的结论! 看似从严判断,其实是有的

    判断意义!

    用上面的反证来理解固体样品也在定量限边缘的结果。 也有意义。

    Q14

    霉菌培养应该正置还是倒置?

    霉菌检验培养的规定如下表所示: %title插图%num

    *目前化妆品安全技术规范(2022) 年版)征求意见稿已出台,规定同样 2015 年版。

    从合规的角度来看, 具体检查行为, 在什么领域, 在这一领域严格执行相应的标准要求!

    引申——

    我想提问者真正想问的不是这方面, 但霉菌培养如何防止污染和交叉污染。

    专业教师系统研究了霉菌培养的污染, 结论是 GB4789.15 (包括国内外主流食品霉菌检测标准)将倒置改为正置是多方面权衡的结果,不仅仅是污染。

    我的建议: 请关注如何通过切实可行的手段有效防止污染,而不是纠结于培养的倒置或正置。

    有效手段通常如下,但不限于:  

    1)定期消毒霉菌培养区;使用杀孢子剂等特殊消毒剂;  

    2)在霉菌培养过程中,不要移动平板,以防止孢子扩散;如果在培养过程中需要观察菌落形态和计数,请合理规划平板放置和观察方法;  

    3)霉菌平板可用密封膜密封, 或将霉菌平板放入灭菌袋或呼吸袋中。但是,请注意不要密封太紧,或者袋子太紧, 保证培养中氧供应充足。但是,请注意不要密封太紧,或者袋子太紧, 保证培养中氧供应充足。

    Q15

    在沙门氏菌实验中,阴性需要生化鉴定吗?

    阴性对照实验有什么意义?这一点需要弄清楚。至于是否需要生化鉴定,不能一概而论。

    生化鉴定前的流程, 选择性分离是必然的。在选择性分离平板上, 阴性对比没有菌落生长,自然没有生化鉴定(即不需要生化鉴定);如果有菌落生长,但菌落形态, 通过检验者的主观判断就能明确知道非沙门氏菌(如沙门显色培养基上的菌落形态的识别, 最容易得出结论), 当然,不需要生化鉴定。

    这两种情况, 这一步阴性对照, 它起到了应有的作用。还有一种情况: 即平板上的菌落形态接近沙门菌的典型或疑似形态, 不能通过主观判断得出结论,这一步自然阴性对照也不能起作用。当然,后续步骤需要区分,包括生化鉴定。

    另外,阴性对照哪一步可以对照? 这也取决于检员设置的阴性对照是什么样的阴性对照。理论上说, 非沙门菌, 可作为沙门菌的阴性对照;

    但其实选择并没有那么广泛。可以参照 GB4789.28 对沙门菌选择性平板验收中的选择性和特异性对照菌进行阴性对照。

    Q16

    在霉菌测试过程中, 特殊样品稀释倍数越大,菌落数越多。如何报告结果?

    首先, 提问者并没有详细说明这种样品的特殊性到底特殊在哪里、也没有给出具体的稀释倍数越大菌落数越多的数据, 如何报告, 我不能提出明确的建议。

    其次, 样品特殊,导致稀释倒置, 样品通常具有抑菌性。抑菌性的降低乃至去除, 可通过适当的稀释来实现。提问者的现象, 可能是稀释倍数尚未达到适当的阶段性结果。假如试图继续稀释, 稀释后可能出现的几种连续稀释的结果是菌落稀释越少, 此时, 可以用这些稀释菌落数来报告结果。

    但是, 稀释不是无限的。这个时候, 在样品的预处理阶段,应考虑采用适当的方法来降低或去除抑菌性。比如说, 酸性样品, 调节 pH 值是最常见的方式。

    中和剂, 也是一种切实有效的方法。不过, 食品检验标准, 这方面缺乏规定。可参考《中国药典》(2020 年版)四部 1105 中的意见。%title插图%num

    最后,请注意 GB 4789.15-2016 细节-稀释液

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    2022-8-5 21:10:55

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